研究人员开发了一种新方法,称为PUMA,利用Cas12核酸酶检测RNA,扩展了CRISPR-Cas系统的能力。这项技术承诺实现高准确性和广泛的应用。
细菌具有称为CRISPR-Cas系统的防御系统,以保护它们免受病毒侵害。这些系统使用导向RNA(crRNA)和Cas核酸酶来识别和切割外源DNA,使其无害。人类已将这一策略应用于分子技术,如CRISPR基因编辑。位于维尔茨堡的亥姆霍兹RNA感染研究所(HIRI)开发了PUMA,以利用Cas12核酸酶检测RNA,建立在先前的工作基础上。
分子诊断中的一个挑战是Cas12核酸酶对DNA靶标的有限使用及对称为PAM的特定识别序列的需求。PUMA通过重新编程tracrRNA,引导Cas12到DNA靶标,克服了这些限制,使RNA生物标志物检测无需特定识别序列。
通过重新编程tracrRNA,研究人员可以针对RNA生物标志物,包括那些特有的RNA病毒,而无需特定识别序列。这种灵活性提高了使用CRISPR技术进行RNA检测的速度和准确性。
研究小组通过使用单个重新编程的tracrRNA识别与急性脓毒症相关的细菌病原体,证明了PUMA的有效性。这种简化的方法可以区分不同类型的细菌,并在各种病原体和癌症生物标志物的分子检测中具有潜在应用。
该技术的未来计划包括实现多重检测输出,并扩大其在研究和临床环境中的应用。研究人员希望PUMA将鼓励进一步探索tracrRNA的重新编程,并增强基于CRISPR的诊断能力。